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          使用凱氏定氮法測定蜂王漿粗蛋白

               1.原理     
              以濃硫酸消化分解蛋白質,其中的氮變成氨,再與硫酸化合生成硫酸銨。生成的硫酸銨與氫氧化鈉反應再生成氨,用蒸餾法使氨蒸出,用標準濃度的硫酸溶液與其反應,剩余的硫酸再經氫氧化鈉標準溶液滴定,從實際消耗的酸量可推算出生成的氨量。 
                2.儀器與試劑 
                (1)儀器:分析天平(0.000 lg)、50ml凱氏燒瓶、凱氏定氮半微量蒸餾裝置1套、滴定裝置1套。 
               
               (2)試劑: 
                濃硫酸(分析純,密度1.84)。 
                硫酸銅與硫酸鉀混合試劑:稱取5水硫酸銅1g、硫酸鉀10g,置于研缽中混合均勻,研細備用。 
                混合指示劑:量取0.1%次甲基紅乙醇溶液2份和0.1%溴甲酚綠乙醇溶液3份,臨用時混合。 
                2%硼酸溶液:稱取硼酸2g,量取混合指示劑2ml、乙醇20ml,置于錐形瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至100ml,搖勻備用。 
                40%氫氧化鈉溶液:稱取氫氧化鈉40g,加蒸餾水溶解并稀釋至100ml。 稀硫酸:量取濃硫酸5.7ml,加蒸餾水稀釋至100ml。 
                0.1 mol/L鹽酸標準溶液的配制和標定: 
                配制:量取濃鹽酸溶液9ml,加蒸餾水稀釋至1000ml,搖勻備用。 
                標定:準確稱取在270 -300℃干燥至恒重的基準無水碳酸鈉約0.15g,置于150ml錐形瓶中,加蒸餾水50ml使其溶解,滴入混合指示劑10滴,用被標定的鹽酸溶液滴定,至溶液由綠色變為紫紅色時,煮沸2min,冷卻至室溫,繼續滴定至溶液由綠色變為暗紫色為終點。 
                使用前,用蒸餾水將0.1 mol/L鹽酸溶液準確稀釋10倍,配制成0.01 mol/L的鹽酸溶液。
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                3.測定方法 
                (1)消化:準確稱取蜂王漿樣品約1g,放入干燥的凱氏燒瓶內,加入2g硫酸銅與硫酸鉀混合試劑,再沿瓶壁緩緩加入61ml濃硫酸,在瓶口放一小漏斗,使燒瓶成45°斜放,在通風櫥內置于電爐上加熱消化(先小火緩緩加熱,使溶液溫度保持在沸點以下,等暴沸停止后,逐步加大火力)。待消化液呈清澈的亮綠色后,再繼續加熱30min,消化即可完畢(消化時間約為lh),冷卻后備用。 
                (2)蒸餾:量取2%硼酸溶液10ml置于100ml的錐形瓶中,加入混合指示劑2滴和少量稀硫酸,將冷凝管尖端浸入液面下。然后,將凱氏燒瓶中的消化液經由漏斗移人蒸餾器中,用少量蒸餾水淋洗凱氏燒瓶和玻璃漏斗數次。向蒸餾器中加入40%氫氧化鈉溶液約25ml之后,再加入5ml蒸餾水(一半流入蒸餾器,一半在玻璃杯中作水封)。用調溫電爐加熱開始蒸餾。待錐形瓶內溶液的顏色由酒紅色變為藍綠色時,繼續蒸餾10min,將冷凝管尖端提出液面,使蒸汽繼續沖洗1 min,用少量蒸餾水淋洗尖端,停止蒸餾。 
                (3)滴定:用0.01 mol/L的鹽酸溶液滴定錐形瓶中吸收的氨量,滴定至溶液由藍綠色變為灰紫紅色為終點,并作空白試驗校正。 
                4.計算       
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          鑒于手工操作比較繁瑣,推薦使用阿爾瓦凱氏定氮儀KN680進行測定,全自動操作,
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